二尖瓣關閉不全要進行相關的檢查才能正確地診斷治療。檢查手段分別有以下幾種：
體格檢查 心尖區收縮期雜音是其最主要的體征，雜音多為全收縮期的，呈高調吹風樣，多向腋下及左肩胛部傳導，當累及瓣葉交界區或後瓣時，雜音可傳導至胸骨左緣二、三肋間及主動脈瓣第二聽診區。深吸氣時雜音響度減弱，呼氣時響度可稍增強。 少數為粗糙雜音，當累及腱索或乳頭肌時可有音樂樣雜音，雜音的響度取決於瓣膜損害程度、返流量以及房室間的壓力差。其他體征尚有第一心音的減弱，肺動脈瓣區第二心音亢進，以及出現病理性第三心音等。心尖區可有抬舉性搏動和全收縮期”震顫”。
心電圖檢查
輕度二尖瓣關閉不全者心電圖可正常。嚴重者可有左心室肥大和勞損；”肺動脈高壓”時可出現左，右心室肥大的表現。慢性二尖瓣關閉不全伴左心房增大者多有”心房顫動”。窦性心律者P波增寬且呈雙峰形，提示左心房增大。
心導管及選擇性左心室造影檢查
左心房壓力升高，收縮期平均壓可達2～2.7kPa（15～20mmHg），壓力曲線示V波高而尖，下降急驟，V波大於Q波，單純二尖瓣關閉不全病例左心房和左心室舒張期壓差不明顯。
