體征：在胸骨左緣第2、3肋間可聞及Ⅱ～Ⅲ級收縮期吹風樣雜音，性質較柔和。雜音產生的原因是心房水平的“左向右分流”，右心容量增多，肺動脈擴張，同時由於肺動脈瓣的血流增多造成肺動脈瓣相對狹窄，血液在擴張的肺動脈內產生漩渦，從而產生雜音。肺動脈瓣區第二心音亢進，常伴有固定性分裂。分流量大時三尖瓣聽診區可聞及舒張期雜音，系大量血液經三尖瓣口進入右心室引起。部分病例在胸骨左緣第4、5肋間可聞及收縮期雜音或舒張期雜音，前者是由於三尖瓣相對關閉不全所引起，後者是由於肺動瓣相對關閉不全所致。當肺動脈高壓形成後，肺動脈瓣區收縮期雜音可逐漸減輕，但肺動脈瓣第二音亢進更加明顯。晚期病人出現紫绀、杵狀指（趾）、肝髒腫大、水腫等體征。
心電圖檢查：典型的房間隔缺損顯示P波增高，電軸右偏。大部分患者伴有右束支傳導阻滯，可為不完全性或完全性的。右心室肥厚，心髒呈順鐘向轉位。原發孔缺損常表現為電軸左偏和逆鐘向轉位。
X線檢查：肺血增多，右心房和右心室肥大，肺動脈段突出，透視下可見肺門“舞蹈”，主動脈結縮小。
超聲心動圖檢查：二維超聲可顯示房間隔回聲脫失區，右心房及右心室增大。超聲造影可顯示負性缺損。彩色多普勒可顯示分流的方向。
右心導管檢查：導管可通過缺損從右心房直接進入左心房。右心房內血氧含量較上、下腔靜脈高1.8體積%以上時即可診斷本病。有時因層流的關系，血氧增加可出現在心室水平。肺動脈內壓力有不同程度地增高。
