心導管檢查顯示左心室流出道壓力差可以確立診斷。心室造影對診斷也有價值。臨床上在胸骨下段左緣有收縮期雜音應考慮本病，用生理動作或藥物作用影響血流動力學而觀察雜音改變有助於診斷。
本病須作以下鑒別診斷： （一）心”室間隔缺損”收縮期雜音部位相近，胸骨左緣粗糙的收縮期雜音可導致兩病混淆，但為全收縮期，心尖區多無雜音，鑒別點：①應用藥物雜音激發試驗，HCM可使雜音增強或變弱，室間隔缺損則雜音無變化；②超聲多普勒可顯示室間隔連續中斷及左向右分流的血流頻譜。 （二）主動脈瓣狹窄症狀和雜音性質相似，鑒別要點為： ①收縮期雜音位置較高，以胸骨右緣第2肋間為主以及胸骨左緣2～4肋間明顯，雜音向頸部傳導，用改變心肌收縮力和周圍阻力的措施對雜音響度改變影響不大，
②主動脈瓣第二音減弱；
③可出現舒張早期吹風樣雜音；
④X線示升主動脈擴張，主動脈瓣可有鈣化影；
⑤超聲心動圖可發現主動脈瓣病變；
⑥左心導管檢查左心室與流出道之間無壓差，而左心室與主動脈之間有收縮期壓差。
（三）風濕性二尖瓣關閉不全雜音相似，但多為全收縮期，血管收縮藥或下蹲使雜音加強，常伴有”心房顫動”，左心房較大，超聲心動圖不顯示室間隔缺損。
